Что можно сделать из бисера начинающей рукодельнице?
Что можно сделать из бисера для начинающих ? Думаю многие мастера и мастерицы задавались этим вопросом на начале своего творческого пути. Сегодня мы узнаем с вами ответ на этот вопрос!
Изделия из бисера, жгуты, браслеты, серьги, цветы – все это выглядит очень красиво.Но легко ли сделать – нет. Особенно начинающим рукодельницам. Но все начинается с малого, с азов. Так и в случае с бисером. Со временем, развив навыки и скорость работы, вы сможете изготовлять не только разные фигурки зверьков, но и сложные украшения из бисера.
Сначала разберем, что такое бисер и какой он бывает в продаже. Почти весь бисер делают из стекла, различается он по форме и цвету. Самый дешевый – китайского производства. Бисеринки разные по размерам (что крайне неудобно для работы) и со временем он может «полинять». Качественный, но дорогой – чешский и японский, здесь бисер одного размера и цвет не теряет. Бусинки бисера бывают разных форм – круглые, квадратные, продолговатые (в виде цилиндриков). По окраске бисер делают: непрозрачный и прозрачный, глянцевый, матовый, сделанный «под металлик».
Что можно связать из бисера начинающим рукодельницам?
Прежде всего – разные фигурки зверьков, которые потом можно будет использовать в виде брелоков, элементов в украшениях или же подарить кому-то. Используя бисер можно сделать: крокодильчиков, котов, пауков, медвежат, мышек. Принцип работы один и тот же – подбираем цвета и делаем каркас для тела зверюшки. Первым делом нужно подобрать цветовую гамму в будущей работе. Для этого нужно приобрести необходимые материалы, купить бисер в Москве, нить, иглы и другие материалы для воплощения в жизнь именно вашего изделия. А когда уже сделали основу зверюшки – доплетаем ножки и ушки, в конце фиксируем надежно нить, чтобы изделие не распалось на бусины. Для этой работы вам понадобиться тонкая игла (чтобы быстро нанизывать бисеринки) и коробочки для хранения бисера по цветам. На тему «как сделать самую простую зверюшку из бисера» в интернете создано много видео-руководств и схем. Вот замечательное видео, где показан весь процесс создания милой божьей коровки из бисера.
Начинающие рукодельницы также могут плести различные букетики из цветов. Бисерные плетеные цветы можно оформлять в разные композиции, выставлять в виде вазонов, которые будут «цвести» круглый год. Начинающие могут попрактиковаться плести из бисера закрытые бутоны тюльпанов. Для этого плетут четыре одинаковых лепестка в виде ромбов и соединяют по краям в бутон тюльпана (внутрь помещают круглую бусину для формы). Ниже видео, в котором рукодельница подробно рассказывает и показывает как из бисера сделать васильки.
А еще из бисера можно делать самые разнообразные украшения – кольца, браслеты, сережки, колье, заколки для волос. Научившись разным техникам бисероплетения и используя свою фантазию, вы сможете сами создавать уникальные, авторские вещи. От простых сережек-киточек до сложных плетеных жгутов с рисунками.
А вот бисерные жгуты – очень красивые и востребованные украшения среди девушек. Жгуты плетут по кругу, используя нить и крючок. В конце, когда жгут достигнет необходимой длины, нить фиксируют и красиво оформляют края жгута при помощи застежек. Следует начинать с простого – с однотонного жгута. Когда вы уже будете легко и быстро вязать жгуты, вы уже сможете их разнообразить – вязать по цветной схеме. Для этого нужно будет просто скачать и установить одну из бесплатных программ для ПК по созданию схем для жгутов. Вот названия некоторых программ – Jbead, CrochetBeadPaint, DB-BEAD. В них можно указать: количество цветов, количество бисерин в ряду, длину жгута. Программа автоматически рассчитает в каком порядке, сколько и какого цвета бусин вам нужно будет набрать на нить и вязать жгут.
- Элементарные фигурки зверьков.
- Вязаные фрукты и ягоды (вишенки, клубника, виноград).
- Простые сережки и браслеты.
- Бисерные деревья и цветочные композиции.
И это еще далеко не весь список! Главное ведь в бисероплетении – желание работать и фантазия.
Обязательно продолжаете совершенствовать своё мастерство, а наш раздел Бисероплетение для начинающих поможет вам пройти этот путь с удовольствием!
Изготовление традиционных украшений из бисера. Бусы из бисера | Традиционные ремёсла и хозяйство
Изготовление традиционных украшений из бисера. Бусы из бисера
- Вид занятия:
- ремёсла
- Назначение:
- шейное украшение
- Традиционно занимались:
- женщины
- Материалы и инструменты:
- бисер, жемчуг, леска, конский волос.
На Русском Севере всегда большой популярностью пользовались жемчужные и бисерные серьги и бусы. Для изготовления украшений и ожерелий использовался местный жемчуг, добывавшийся в реках Олонецкой губернии, впадающих в Белое море и Онежское озеро. В конце ХIХ века, когда жемчужный промысел пошёл на спад, вместо жемчужин, как правило, неправильной формы, стали использовать бисер разного качества от мелкого так называемого «монастырского» до более крупного венецианского, чешского и русского бисера. Производство русского бисера началось на фабрике М. В. Ломоносова в Усть-Рудице под Петербургом, которая существовала в 1755–1766 годах. За 10 лет работы фабрики было выпущено не более 100 пудов стекляруса и несколько сот пудов бисера, тогда как из-за границы ввозилось более тысячи пудов бисера. В конце XIX — начале XX века российский бисер изготавливался в небольших кустарных мастерских Киевской, Московской, Казанской и других губерний, купить который можно было на многочисленных олонецких ярмарках.
Во многих описаниях исследователей Севера о костюме Олонецкой губернии часто встречалось упоминание, что женщины в праздники любили одевать самые лучшие наряды, украшая голову головными уборами, расшитыми жемчугом, на шею одевали прабабушкины жемчужные нити, в уши вдевали жемчужные серьги, одевали кольца и браслеты. На многих фотографиях молодых девушек в нарядных костюмах мы видим большое количество жемчужных нитей и бус.
Оригинальным шейным украшением были бусы, созданные в технике низания бисера на конский волос в виде яйцевидных звеньев. Звенья цепи выполнялись из шести или восьми бисерных нитей, переплетенных между собой и составляющих крупные ажурные бусины. Для изготовления таких бус использовался мелкий бисер, по цвету напоминающий речной жемчуг.
Технология изготовления ажурных бус, как и многие другие технологии по изготовлению украшений из бисера, восстановлена в музее-заповеднике «Кижи» в 90-е годы ХХ века искусствоведом Светланой Васильевной Воробьёвой и её учениками — мастерами «Ожившей экспозиции».
© Музей-заповедник «Кижи»Особо ценный объект культурного наследия народов Российской Федерации.
Кижский погост входит в Список всемирного культурного и природного наследия ЮНЕСКО.
Все материалы сайта не предназначены для лиц моложе 12 лет.
Допускается копирование и цитирование всех материалов, размещённых на сайте музея-заповедника «Кижи» (kizhi.karelia.ru), если цитируемое сопровождается точной активной ссылкой на оригинал и указанием всех правообладателей (в том числе музей-заповедник «Кижи»). При использовании любых материалов в печатных изданиях необходимо получить согласие от администрации музея на публикацию. По вопросам использования изображений необходимо ознакомиться с Положением о правилах использования изображений музейных предметов и музейных коллекций, а также зданий и памятников.
Видео мастер-класс по изготовлению чокера из бисера
Чокерами в украшениях принято называть любое украшение, которое «высоко сидит» на шее, или ложится вокруг неё, но имеет небольшую длину. Их носят отдельно, с цепочками, или надевают сразу несколько, но они в этом случае должны немного отличаться по длине.
Чокерами могут быть ленты, петли из плотной лески, цепочки разной толщины с подвесками или без, стразовые ленты и даже широкие расшитые бисерные сетки.
На данный момент весьма популярны стали тонкие однорядные бисерные нити, простые и прекрасные в своей простоте. Такие чокеры из бисера можно делать из любых материалов — подойдут мелкие граненые бусины рондель, или можно купить недорогой китайский бисер. Сочетание разных цветов и размеров бисера и бусинок даёт бесконечное количество вариаций, также модно использовать небольшие металлические подвески или коннекторы.
В приведенном видео мастер-классе показан отличный пример изготовления чокера, с которым может справится даже новичок.
Чем лично мне понравился данный МК? Тем, что тут использован минимум фурнитуры, а значит данный вариант изготовления доступнее по деньгам и проще по навыкам.
На фото №1 ниже мы покажем как в данном Мастер классе крепится застежка без дополнительной фурнитуры.
Фото №1. (Крепление застежки к бусам на двойную нить)
При использовании данного способа можно не обрезать один из кончиков нити и продолжать набор бисера на двойную, это обеспечит дополнительную прочность и долговечность Вашему изделию.
Также я покажу как закрепить застежку одинарной нитью на Фото №2 (данный способ подойдет для крепления концов двойной нити, так Фото №1 это начало двойной нити, а Фото №2 это крепление хвостиков)
Фото №2 (крепление застежки к бусам одной или несколькими нитями)
Варианты крепления без дополнительной фурнитуры проще, но нить может перетереться со временем, поэтому если хотите сделать надежное качественное изделие, то лучше использовать протекторы для нити (подковки на фото). Протекторы имеют выемку внутри в которой размещается нить, таким образом контакта нити на подвижных частях с фурнитурой нет и нить не перетирается. Покажем Вам как это выглядит на Фото №3
Фото №3 (крепление застежки к бусам с использованием протекторов и обжимных бусин).
Материалы которые мы рекомендуем:
Основа — джинсовая нить 20s/3 в выбираем её в тон/цвет к основному бисеру в украшении
Фурнитура: в данном МК использованы только замочки «лобстер» и «литые колечки», но Вы можете использовать застежки тоггл или застежки-крючки, тогда покупать колечки Вам не потребуются.
Если Вы решите крепить застежку при помощи протекторов и обжимных бусин, то их можно приобрести тут
Наполнение: так как тут минимальный расход материалов, мы можем посоветовать наши маленькие упаковочки с чешским бисером (размер 10/0) по 15грамм и 20 грамм;
бусины рондель или крупный чешский бисер 8/0 для акцента;
разделители для бусин, металлические подвески и коннекторы для оформления
Также, если вдруг у Вас нет — обязательно купите иголочки для бисера
Ниже я приведу картинки из интернета, это работы разных Мастеров для Вашего вдохновения:
Серьги из бисера своими руками
В этой статье пойдет речь о:
Украшения, созданные своими руками – это красиво, стильно и уникально. И такие аксессуары точно будут вами любимы, ведь вы будете испытывать гордость за то, что сами смогли создать красоту. Вы можете воплотить любые фантазии, создавая свой образ и творя украшения. Это не сложно, и наш мастер-класс позволит вам научиться основным правилам и даже создать первые шедевры очень быстро.
Серьги из бисера: почему именно из него
Вариантов, из каких материалов можно создать сережки, очень много. Но сегодня мы остановимся только на бисере.
Из этого материала можно создать любые серьги – длинные, короткие, объёмные или почти невидимые. Работать с этим материалом очень легко – если вы хотя бы раз плели из бисера, вы справитесь с любой схемой. Бисер – недорогой материал, а выбор его в магазинах огромный. Комбинируя цвета, размеры, вы можете создавать действительно уникальные вещи.
К тому же, бисер легко комбинировать с другими материалами – бусинами, стеклярусом, перьями, лентами или искусственными цветами. Это еще больше расширяет возможности проявить воображение.
Что вам понадобится?
Для создания сережек из бисера вам понадобятся:
— собственно, бисер. Чуть позже подробнее остановимся на том, как его выбрать.
— тонкие иголки – ими вы будете нанизывать бисер.
— нить. Она должна быть прочной – от этого зависит качество и сохранность будущего изделия. Можно выбрать материал, в состав которых входит лавсан, или чисто синтетические нити. Если же вы все же сомневаетесь в прочности, можете обработать нить воском. Иногда вместо нити можно использовать леску.
— проволока – тонкая и гибкая. Ее будем использовать для элементов, которые не должны менять форму. — швензы. Или же попросту застежки. Это та часть сережки, которая продевается в дырочку в ухе. Не стоит использовать алюминиевые застежки – они окисляются.
Как выбрать бисер?
Начнем с азов. Если вы никогда не сталкивались с работой с бисером, то знайте – она делится на такие типы:
— бусины – классический бисер круглой формы;
— рубка – коротенький трубочки с гранями;
— стеклярус – трубочки большей длинны, чем рубка, обычно – с округленными краями;
— шарлотта – бисер, один бок которого круглый, а второй – плоский. Плоская часть преломляет лучи солнца и он ярко блестит.
Вот некоторые советы по выбору:
1. Выбирайте японский или чешский бисер. Он достаточно прочный, и нить через него может пройти несколько раз. Да и брака в нем мало.
2. Перед тем, как приступить к созданию украшений, переберите бисер – уберите деформированные, бракованные бусины;
3. Для изготовления сережек стоит использовать мелкий бисер.
Основные схемы и техники
Существует масса готовых схем сережек из бисера. А еще больше вы можете придумать сами, после того, как изучите основные приемы и простейшие техники. Предлагаем вам несколько самых распространенных вариантов аксессуаров, в которых как раз используются наиболее часто встречающиеся приемы. Изучите их, попробуйте изготовить предложенные украшения – и вы будете готовы к собственным экспериментам.
Оригинальные варианты красивых сережек из бисера, с которыми справится и новичок
Если даже вы никогда раньше не работали с бисером, вы легко справитесь с простейшими схемами сережек. Для начала начните с элементарных вариантов – серьг-ромбов и сережек на леске.
Схема плетения сережек на леске
1. Нарежьте леску на три кусочка разной длинны – двенадцать, пятнадцать и девятнадцать сантиметров;
2. Нанижите бисер – на самый короткий кусочек 6 сантиметров, на средний – 8 сантиметров, на самый длинный – 10 сантиметров.
3. Соберите вместе все концы лески, у вас получится три капли. В качестве застежки используйте швензу – закрепите капли в ней. Вторая сережка делается точно так же.
На создание такого шедевра у вас уйдет буквально 10-15 минут.
Следующие сережки-ромбы тоже очень легко создаются и на них у вас не уйдет много времени.
Схема плетения сережек-ромбов
1. Нанижите одну бисеринку на центр нити;
2. Следующую бисерину наденьте на левый конец нити, и проденьте через нее правый конец. Крепко затяните;
3. Повторяйте предыдущий пункт, пока не получите край в семь сантимтеров;
4. Теперь двигайтесь в обратную сторону: конец нити с нанизанной бисериной пропустите через вторую бусинку с конца. Дальше двигайтесь тоже через одну, пропуская нить через четные бусинки;
5. Наращивайте ряды, пока у вас не получится квадрат по форме;
6. Готовое изделие закрепите на швензу.
Готово! Теперь у вас есть яркий аксессуар!
Готовы попробовать что-то посложнее?
С простейшими узорами вы справились. Время перейти к более сложным узорам.
Серьги Оскар
Сережки Оскар де ля Рента – это уже мировая классика. Известный модельер создал элегантные клипсы, в центре которых – плотный шар из бисера. От него отходит одна из объемных деталей – это может быть пирамида, жгут, кисточка или овал. Очень важно купить хорошие клипсы, на которых будут отверстия, к каким и будет пришита сережка из бисера. Объёмные детали можно не плести, а сшить из фетра и вышить бисером.
Для этих сережек хорошо подойдет бисер-шарлотта.
Схема плетения сережек Оскар:
1. На неширокую ленту или полосу картона пришейте тонкие нити, с нанизанным в один ряд бисер. Длинну нити выбирайте по собственному желанию.
2. Необходимо сделать семнадцать-двадцать таких нитей. Затем скрутите ленту, прошейте ее – получится кисточка. Качественно скрепите основу, сделайте больше стежков.
3. Обшейте цилиндр из ленты. Нанижите бисер в один ряд и оберните этой нитью основу кисточки. Закрепите полученную кисть между бисеринами простыми стежками. Повторяйте это действие, пока вся лента не будет укрыта бисером.
4. Последняя деталь — бусина, которая, собственно, и прикрепит вашу ленту к клипсе. Ее удобнее всего плести на леску. Нанижите четыре бисеринки, проведите иглу в первую в заданном направлении. Выйдет кольцо.
5. Затяните узлом леску. Далее двигайтесь в заданном направлении. Следующую бисерину разместите между первой и второй, продевая иглу во вторую. И по такой же схеме дальше наращивайте ряды.
6. Примеряйте бусину к вашей заготовке. Когда она будет нужного размера, обтяните ее элементом из бисера, и начинайте сокращать количество рядов, пропуская по одной бисерине в каждом.
7. Осталось лишь сшить бусину, обшитую бисером, с заготовленной клипсой и основной деталью декора. Серьги Оскар готовы.
Сережки-снежинки
Это легкие, изящные сережки, которые не будут отягощать мочку уха. Для их создания лучше использовать проволоку. Так элементы будут выглядеть изящно, но при этом будут хорошо держать форму. Бисер можно использовать золотой с белым, синий или голубой. А можно сделать снежинки не характерно для них цвета – оранжевые, например.
Схема работы следующая:
1. Нанижите шесть бисерин. Последнюю бусинку проволока должна пересечь накрест.
2. На конец проволоки (выбирайте любой из двух) нанижите одну большую бусину. Затем нанижите пять обычных бисерин и протяните проволоку через первую. У вас получится круг.
3. Повторить этот шаг, снова надев бисеринку и протянув проволоку через бусину, соседнюю для первой из шести. Видите снежинку, у которой в центре круг из шести бисеринок, и лучи из пяти бисерин?
4. Повторяйте два предыдущие пункта, пока у вас не будет законченная снежинка. Скрепите концы проволоки и закрепите на швензу.
Мы надеемся, что наш короткий мастер-класс помог вам убедится, что создание серег из бисера – процесс не сложный. Теперь вы готовы к собственным творческим поискам. Создавайте красоту и носите ваши украшения с удовольствием!
пошаговый мастер-класс и схемы ᐈ Блог Дома Бусин
Бижутерия из бисера на протяжении многих столетий не теряет своей актуальности и привлекательности для представительниц слабого пола. И это легко понять: ведь украшения из бисера обычно выглядят очень эффектно, нарядно и нетривиально.
Многие именитые дизайнеры дополняют свои модели бисерными аксессуарами. Но один из самых приятных моментов состоит в том, что бижутерию из бисера совсем несложно изготовить самостоятельно и даже параллельно с просмотром любимого сериала. И сегодня мы попробуем вас в этом убедить. В этой статье мы расскажем, как сделать серьги-треугольники из суперкачественного японского бисера сорта Delica. Выбор этого бисера принципиален, поскольку именно он лучше всего подходит для изготовления таких сережек. Во-первых, у него цилиндрическая форма, а не круглая, и это важно для того, чтобы треугольник не перекосился. А во-вторых, размер его бисеринок идеален, чтобы создать правильную и ровную геометрическую фигуру треугольника. В ходе работы будем использовать сочетание двух техник бисероплетения: мозаичную и ндебеле.
Необходимые материалы
Для создания наших треугольных сережек мы приготовили:
- японский бисер Delica белого и черного цветов,
- капроновые или лавсановые нитки для бисероплетения,
- пару швенз
- иглу № 12 для бисера.
Пошаговая инструкция
Плетение плоского треугольника начинается из его центра.
1. Наберите первые три бисерины и сомкните их в круг. При этом будет не лишним пройти вкруговую нитью 2 раза для большей надежности. Если не получится, то хотя бы с помощью узла зафиксируйте нитку.
2. Далее начинается следующий ряд, в котором между всеми смежными бисеринами предыдущего ряда добавляйте по 2 бисерины в технике ндебеле (ориентируйтесь на рисунок-схему).
3. В третьем ряду в каждом из углов опять добавляйте ндебельную пару бусинок, а на каждой грани треугольника вплетайте бисерину, используя мозаичную технику.
4. В четвертом ряду плетения вновь в каждом из углов вплетайте ндебельную пару бусин, а на каждой грани треугольника прибавьте по две бисерины в технике мозаики.
5. В каждом следующем круге на стороне треугольника прибавляйте по одной бусинке и продолжайте плести треугольник по этой схеме до необходимого вам размера.
6. Полностью завершив плетение треугольника, необходимо прикрепить на одном из его углов петельку для крепления швензы. Для этого нанижите 6 бисерин и сформируйте петлю, сразу вставив в нее швензу. Нитку от плетения закрепите, продев ее несколько раз сквозь бисерины готового треугольника, а затем обрежьте оставшийся кончик нити.
В заключение предлагаем вам рассмотреть несколько несложных схем для плетения аналогичных треугольников из бисера. Как видите, плести их совершенно просто, главное – придерживаться схемы, соблюдая цветовые переходы.
Бисерные треугольники можно сделать яркими и разноцветными, а можно взять для них бисер спокойных оттенков – и они подчеркнут сдержанное благородство вашего наряда. Дизайн треугольных сережек можно придумать практически к любой блузке или платью и они станут отличным стильным дополнением ваших разнообразных луков.
И в конце добавим одну небольшую подсказочку: треугольные элементы, сплетенные из бисера, можно еще использовать для составления оригинальных браслетов в комплект к сережкам, а также в качестве подвесок и кулонов.
Увеличением или уменьшением числа рядов треугольника вы можете изменить модель всего украшения.
А в результате таких экспериментов вы обязательно создадите целые наборы своих эффектных, оригинальных и эксклюзивных аксессуаров.
Микро-тренд 2021: игрушечные украшения из бисера
На украшениях из бисера, ракушек, жемчуга и бусин все помешались еще прошлым летом. Но если тогда все еще носили более сдержанные и аккуратные варианты, то в новом теплом сезоне не стоит бояться экспериментировать.
Яркие фенечки, как в детстве, любят носить Белла Хадид и Дуа Липа. Вы можете сделать их самостоятельно, вспомнив прошлое, или же присмотреть что-то интересное в магазинах. Можно наслаивать разные виды таких украшений в одном образе. Миксируйте всевозможные цвета, фактуры и длину: этой весной чем больше изделий, тем лучше.
Чтобы еще больше вдохновить вас разнообразить свои весенние образы, вот несколько фото трендовых украшений:
Блог о рукоделии — модные в Корее колечки из бисера
В Корее, как и во всём мире, сейчас популярны украшения из бисера. Уже третий год подряд летние украшения из цветного бисера не выходят из моды. В 2019 некоторые дизайнеры (Jacquemus и Lanvin) стали вплетать бисер в украшения с золотом. Что изменилось в 2020? В период карантина, благодаря большому количеству свободного времени, многие начали заниматься рукоделием, а именно плетением из бисера. Кто-то плел сам и делился своими любимыми лавками на рынке Тондэмун, кто-то покупал готовые украшения в небольших инстраграм-магазинчиках. Кроме того из бисера делали не только кольца, браслеты и ожерелья, но и брелки, набирая из букв-бусин свои имена или имена любимых артистов, а также вышивали цветочки на шнурках для кроссовок и украшали бисером шнурки для очков и масок. Корейские знаменитости также не остались в стороне, например, Тэён из SNSD и Чонха показали в своих видео, как они делают кольца. Давайте вместе сделаем цветочное колечко из бисера.
Для того, чтобы сделать такое колечко из бисера нам понадобится:
— Леска для бисероплетения (можно взять рыболовную) примерно 50-60см
— Бисер 2.2мм 2 цветов. У нас в примере будут белые и жёлтые.
— Бисер 2мм
— Клей Момент
1. Наберите 6 бусин белого цвета
2. Пропустите правый конец лески через бусину так, чтобы получилось, как на картинке:
3. Наденьте бусину жёлтого цвета, как показано на рисунке.
4. Теперь пропустите оба конца лески через белую бусину, как показано на рисунке.
5. Вернитесь к белой бусине (в верхней части рисунка), пройдя обеими частями лески через 2 бусины с каждой стороны и через 1 в центре.
6. Добавьте бусину меньшего размера, а затем белую бусину нашего стандартного размера.
8. Добавьте бусину жёлтого цвета, пропустив её через оба конца лески.
9. Теперь пропустите оба конца лески через белую бусину, как показано на рисунке.
10. Вернитесь к белой бусине (в верхней части рисунка), пройдя обеими частями лески через 2 бусины с каждой стороны и через 1 в центре.
11. Наденьте маленькую бусину и повторите рисунок до нужной вам длины.
12. Добавьте 1-3 маленьких бусин, если вам не хватает места для ещё одно цветка.
13. Когда закончите, соедините леску с противоположным концом изделия, пропустите через несколько бусин и завяжите узел. Чтобы леска не развязалась, завяжите увел 2 раза и добавьте капельку клея.
Видео:
From Beads with Love от FromBeadsWithLoveTYV на Etsy
Информация, которую я собираюДля выполнения вашего заказа вы должны предоставить мне определенную информацию (которую вы разрешили Etsy предоставить мне), такую как ваше имя, адрес электронной почты, почтовый адрес, платежную информацию и сведения о продукте, который вы заказываете. Вы также можете предоставить мне дополнительную личную информацию (например, для индивидуального заказа ювелирных изделий), если свяжетесь со мной напрямую.
Зачем мне нужна ваша информация и как я ее использую
Я полагаюсь на ряд юридических оснований для сбора, использования и передачи вашей информации, в том числе:
• по мере необходимости для предоставления моих услуг, например, когда я использую вашу информацию для выполнения ваш заказ, для разрешения споров или для поддержки клиентов;
• когда вы предоставили свое утвердительное согласие, которое вы можете отозвать в любое время, например, подписавшись на мой список рассылки;
• при необходимости выполнить юридическое обязательство или постановление суда или в связи с судебным иском, например, для сохранения информации о ваших покупках, если это требуется по налоговому законодательству; и
• по мере необходимости для моих законных интересов, если эти законные интересы не перекрываются вашими правами или интересами, такими как 1) предоставление и улучшение моих услуг.Я использую вашу информацию для предоставления запрошенных вами услуг и в моих законных интересах для улучшения моих услуг; и 2) соблюдение Политики и условий использования продавца Etsy. Я использую вашу информацию по мере необходимости, чтобы выполнять свои обязательства в соответствии с Политикой и Условиями использования Etsy для продавца.
Обмен и раскрытие информации
Информация о моих клиентах важна для моего бизнеса. Я передаю вашу личную информацию по очень ограниченным причинам и при ограниченных обстоятельствах, а именно:
Etsy.Я делюсь информацией с Etsy по мере необходимости, чтобы предоставить вам свои услуги и выполнить свои обязательства в соответствии с Политикой продавца Etsy и Условиями использования Etsy.
Поставщики услуг. Я привлекаю определенные доверенные третьи стороны для выполнения функций и предоставления услуг моему магазину, например компании по доставке. Я передам вашу личную информацию этим третьим лицам, но только в той мере, в какой это необходимо для оказания этих услуг.
Деловые переводы. Если я продам или объединю свой бизнес, я могу раскрыть вашу информацию в рамках этой сделки только в той степени, в которой это разрешено законом.
Соблюдение законов. Я могу собирать, использовать, хранить и передавать вашу информацию, если я добросовестно полагаю, что это разумно необходимо для: (а) ответа на судебный процесс или на запросы правительства; (б) обеспечивать соблюдение моих соглашений, условий и политик; (c) предотвращать, расследовать и решать проблемы мошенничества и другой незаконной деятельности, безопасности или технические проблемы; или (г) защищать права, собственность и безопасность моих клиентов или других лиц.
Хранение данных
Я храню вашу личную информацию только до тех пор, пока это необходимо для предоставления вам моих услуг и как описано в моей Политике конфиденциальности.Однако от меня также могут потребовать сохранить эту информацию для соблюдения моих юридических и нормативных обязательств, для разрешения споров и обеспечения соблюдения моих соглашений. Обычно я храню ваши данные в течение следующего периода времени: 1 год.
Передача личной информации за пределы ЕС
Я могу хранить и обрабатывать вашу информацию через сторонние службы хостинга в США и других юрисдикциях. В результате я могу передать вашу личную информацию в юрисдикцию, в которой действуют другие законы о защите данных и государственном надзоре, чем в вашей юрисдикции.Если предполагается, что я передаю информацию о вас за пределы ЕС, я полагаюсь на Privacy Shield как на правовое основание для передачи, поскольку Google Cloud сертифицирован Privacy Shield.
Ваши права
Если вы проживаете на определенных территориях, включая ЕС, у вас есть ряд прав в отношении вашей личной информации. Хотя некоторые из этих прав применяются в целом, определенные права применяются только в определенных ограниченных случаях. Эти права я описываю ниже:
Доступ. Вы можете иметь право на доступ и получение копии личной информации, которую я храню о вас, связавшись со мной, используя контактную информацию, указанную ниже.
Изменить, ограничить, удалить. Вы также можете иметь право изменять, ограничивать мое использование или удалять вашу личную информацию. При отсутствии исключительных обстоятельств (например, когда я должен хранить данные по юридическим причинам) я обычно удаляю вашу личную информацию по запросу.
Объект. Вы можете возражать против (i) обработки мной некоторых ваших данных на основании моих законных интересов и (ii) получения от меня маркетинговых сообщений после вашего явного согласия на их получение. В таких случаях я удалю вашу личную информацию, если у меня нет веских и законных оснований для продолжения использования этой информации или если это необходимо по юридическим причинам.
Пожаловаться. Если вы проживаете в ЕС и хотите выразить обеспокоенность по поводу использования мной вашей информации (и без ущерба для каких-либо других прав, которые у вас могут быть), вы имеете право сделать это в своем местном органе по защите данных.
Как со мной связаться
В соответствии с законодательством ЕС о защите данных я, Титова Юлия, являюсь контролером вашей личной информации. Если у вас есть вопросы или проблемы, вы можете связаться со мной по адресу [email protected]
Ожерелья для прорезывания зубов из балтийского янтаря: может ли вымывание янтарной кислоты из бусинок оказывать противовоспалительное действие? | BMC Дополнительная медицина и терапия
Материалы
Ожерелья для прорезывания зубов из балтийского янтаря (ожерелье «Престиж» размером 33 см, подлинные балтийские янтарные бусы Little Smiles, Нарангба, Австралия) были приобретены в магазине товаров для малышей и малышей в Брисбене, Квинсленд.Отдельные шарики были разделены по цвету на светлые, средние и темные категории на основании некоторых утверждений, что более светлые шарики содержат больше активного ингредиента, янтарной кислоты [16]. Средний вес шариков был получен путем индивидуального взвешивания 85 шариков (24 светлых, 35 средних, 26 темных). Янтарная кислота, парацетамол, ибупрофен, гидрокортизон и форболмиристат ацетат (PMA) были приобретены у Sigma Aldrich (Сент-Луис, США). Липополисахарид (LPS) из E. coli был приобретен у Enzo Life Sciences (Фармингдейл, США).
Инфракрасная спектроскопия
Гранулы, содержащиеся в запечатанном пластиковом пакете, измельчали в мелкий порошок с помощью молотка. Порошок анализировали с использованием инфракрасного спектрометра (Shimadzu IRPrestige-21 FTIR), используя 20 сканирований на пропускание при настройке самого высокого разрешения, и пропускание анализировали с использованием программного обеспечения IRsolution 1.3 (Shimadzu). Спектры сравнивались с опубликованными данными для балтийского янтаря [17] после адаптации с помощью инструмента WebPlotDigitizer v3.21.
Определение содержания янтарной кислоты
Температура плавления измельченных в порошок шариков составляла 360 ° C, как было определено с помощью прибора Crown Scientific Melting Point Apparatus.Поскольку янтарная кислота плавится при 185 ° C и закипает при 235 ° C, потребовался альтернативный метод, чтобы отделить янтарную кислоту от янтаря без необходимости плавления шариков при очень высоких температурах. Поэтому был разработан метод растворения бусинок. Гранулы погружали в ряд растворителей, включая октанол, метанол, соляную кислоту или гексан. Было обнаружено, что серная кислота влияет на шарики, поэтому шесть шариков (состоящих из двух шариков из каждой цветовой группы) растворяли в 20 мл концентрированной H 2 SO 4 в течение 16 часов.Затем аликвоты по 5 мл (3 повтора) растворов гранулированной кислоты нейтрализовали с использованием 11 мл 18 М NaOH для анализа с помощью ВЭЖХ на содержание янтарной кислоты. Площадь пика растворенных шариков сравнивали со стандартной кривой янтарной кислоты, полученной в серной кислоте и нейтрализованной таким же образом.
Анализ высвобождения янтарной кислоты
Чтобы исследовать, будут ли шарики выделять янтарную кислоту в различных условиях, 22 шарика каждого цвета были погружены в 10 мл фосфатно-солевого буфера (PBS) при pH 5.5 (приблизительный pH кожи человека) или октанол (органическая фаза, имитирующая гидрофобные условия слоев кожи человека). Гранулы оставляли в этих растворах на срок до 24 недель при 37 ° C, а образцы супернатанта собирали через 4, 8, 12, 16, 20 и 24 недели и анализировали с помощью ВЭЖХ на содержание янтарной кислоты. Янтарную кислоту определяли количественно, используя стандартную кривую янтарной кислоты, растворенной в PBS (0,005–10 мг / мл) или октаноле (0,005–0,1 мг / мл).
HPLC
Образцы фильтровали с использованием 0.Мембранные фильтры из ПВДФ 45 мкм. После фильтрации образцы (50 мкл) вводили с помощью ВЭЖХ Shimadzu с использованием колонки Vydac Denali C18 250 × 4,6 мм (Grace Davison Discovery Sciences, Иллинойс, США), снабженной защитной колонкой. Подвижная фаза представляла собой изократический сульфатный буфер, состоящий из 1 мМ серной кислоты и 8 мМ сульфата натрия с pH 2,7, при скорости 1 мл / мин в течение 20 мин. Детектор с диодной матрицей (Shimadzu Prominence SPD-M20A) регистрировал оптическую плотность в диапазоне 200–800 нм с концентрациями, рассчитанными с использованием площади под кривой при 210 нм.Этот метод количественной оценки был проверен на линейность, специфичность, чувствительность (предел обнаружения (LOD) и количественное определение (LOQ)) и межсуточную повторяемость в соответствии с руководящими принципами Международной конференции по гармонизации [18]. Калибровочную кривую по 5 точкам строили для стандартных растворов в диапазоне 0,005–10 мг / мл в PBS (pH 5,5). Он был подготовлен в трех экземплярах с оценкой линейности с использованием линейного регрессионного анализа методом наименьших квадратов. Специфичность исследовали путем сопоставления длины волны образцов и стандартов в диапазоне 200–400 нм, чтобы определить, влияют ли наполнители в виде гранул или другие факторы, влияющие на длину волны максимального поглощения.Чувствительность определялась путем расчета LOD = 3,3σ / S и LOQ = 10σ / S, где σ = стандартное отклонение отклика и S = наклон калибровочной кривой. Промежуточная точность (междневная повторяемость) была выполнена путем расчета% относительного стандартного отклонения (% RSD) 7 измерений для стандартных растворов с концентрацией 0,1 мг / мл в PBS или октаноле, проведенных в течение 6 месяцев.
Оценка противовоспалительной активности
Потенциальные противовоспалительные свойства янтарной кислоты были протестированы с использованием линии клеток моноцитов человека THP-1 (ATCC № TIB-202) [19].Клетки THP-1 (2 × 10 5 ) были дифференцированы в макрофаги путем стимуляции 50 нМ PMA [19] перед обработкой различными контрольными препаратами (парацетамолом, ибупрофеном или гидрокортизоном) или янтарной кислотой. Парацетамол и ибупрофен были выбраны из-за их обычного использования при лечении симптомов прорезывания зубов у детей [20], а гидрокортизон был выбран в качестве положительного контроля из-за его хорошо известных противовоспалительных эффектов и механизмов [21]. Концентрации препаратов основывались на опубликованных наблюдениях за значениями IC50 при ингибировании ЦОГ-1 и ЦОГ-2: гидрокортизон ~ 5 мкМ, ибупрофен ~ 8 мкМ, парацетамол ~ 25 мкМ [22, 23].Несколько концентраций выше и ниже этих значений IC50 были выбраны для определения вероятного воздействия каждого лекарственного средства на воспаление. После 2 часов инкубации только с соответствующими лекарствами или средами клетки стимулировали добавлением LPS (1 мкг / мл) из E. coli , чтобы вызвать высвобождение простагландинов и воспалительных цитокинов [19]. Для количественной оценки воспалительных цитокинов супернатанты собирали через 4 часа стимуляции LPS; для количественного определения простагландинов супернатанты собирали через 20 ч стимуляции LPS.Затем цитокины и простагландины определяли количественно с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), при этом для каждого анализа проводили три независимых эксперимента.
ELISA цитокинов
Для количественной оценки высвобождения цитокинов активированными клетками THP-1 был проведен ELISA для провоспалительных цитокинов IL-1α, IL-1β, IL-8 и TNFα с использованием наборов от BioLegend (Thermo Fisher Scientific; Сан-Диего, США). Все анализы были выполнены в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, планшеты для ELISA покрывали первичным антицитокиновым антителом в течение ночи и дважды промывали.Образцы культурального супернатанта или стандарты цитокинов добавляли в планшеты, инкубировали в течение 3 ч на шейкере для планшетов и дважды промывали. Затем в планшеты добавляли вторичное антитело, конъюгированное с ферментом, инкубировали в течение 2 ч на шейкере для планшетов и дважды промывали. Затем в планшеты добавляли субстрат тетраметилбензидин (TMB) и оставляли для проявления в течение 15 минут, после чего реакцию останавливали добавлением 1 M H 2 SO 4 . Оптическую плотность немедленно считывали с использованием планшет-ридера для ELISA (iMark Microplate Reader, Bio-Rad) при 450 нм.
ELISA по простагландину
Для количественной оценки высвобождения простагландина активированными клетками THP-1 ELISA выполняли для PGE2 с использованием набора от Enzo Life Sciences в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, стандарты PGE2 и культуральные супернатанты инкубировали в лунках планшета с предварительно нанесенным покрытием в присутствии конъюгата PGE2-фермент и антитела против PGE2 в течение 2 часов на шейкере для планшетов и трижды промывали. Затем субстрат паранитрофенилфосфата (pNpp) инкубировали в течение 45 минут, после чего реакцию останавливали добавлением стоп-раствора тринатрийфосфата.Оптическую плотность немедленно считывали с использованием планшет-ридера для ELISA при 405 нм.
Статистический анализ
Стандартные кривые анализа HLPC для количественного определения янтарной кислоты были построены с помощью линейной регрессии, а стандартные кривые из анализа ELISA для количественного определения цитокинов были сгенерированы с помощью 4-параметрической логистической регрессии. Каждый тест ELISA выполнялся трижды в независимых экспериментах; для каждого эксперимента данные были нормализованы относительно контроля, содержащего только LPS, так что эти контрольные клетки составляли 100%, таким образом, значение 200% указывает вдвое больше, чем контроль, а значение 50% указывает вдвое меньше контроля.Нормализованные данные ELISA анализировали с помощью ANOVA с использованием непараметрической модели с апостериорным сравнением Holm-Sidak. Для определения статистической значимости был выбран пороговый уровень альфа p = 0,05, и для всех анализов использовали Prism v7 (программное обеспечение Graphpad, Сан-Диего, Калифорния).
Процесс дизайна — от бусин до ювелирных изделий
Март — это Национальный месяц ремесел, который посвящен воплощению творческих идей в жизнь. Поскольку это идеальное время для творчества, мы подумали, что поговорим с нашими дизайнерами о том, как они воплощают свои идеи в жизнь.Дизайнеры Artbeads Синтия и Чери ответили на несколько вопросов о том, как они создают украшения. Читайте дальше, чтобы вдохновиться на ваше следующее приключение по изготовлению украшений.
Как вы выбираете цвета?
Очень зависит от настроения! Прямо сейчас, поскольку у нас конец зимы и наступление весны, я хотел бы видеть больше солнца. Поэтому я предпочитаю выбирать более яркие или пастельные тона. Иногда цвета должны соответствовать моей одежде. Это то, что вдохновило меня сделать так много колец Айко. Если я работаю с кулоном, то стараюсь сочетать цвета из дизайна кулона с бусинами. — Cynthia
Одно из колец Aiko Синтии в весенних тонах.Иногда отправной точкой может быть подбор наряда, но обычно меня вдохновляют цвета самих бусин или цвета центральной подвески. В конце концов, эти красивые цвета обычно сочетаются с тем, что у меня есть. — Cheri
Ожерелье-объявление Gabriel’s Announcement с бусинами, идеально сочетающимися с фокусом.Что первично, бусинки или дизайн?
Это зависит от техники, которую я буду использовать.Что касается бисероплетения, я в первую очередь думаю о дизайне. Например, если я хочу сделать браслет из пейота, я думаю: «Хочу ли я сделать прямую ленту или украсьте ее хрустальными бусинами или кинжалами?» Что касается простой ленты из пейота, мне нравится ощущение бусинок Айко, но я мог бы использовать бусины большего размера, чтобы сочетаться с бусинами другой формы. Иногда бусы меня вдохновляют. Меня могут очень взволновать цвет бус, изображение на кулоне или даже какой-нибудь шарм. В таких случаях дизайн идет после. — Синтия
Я работаю в обоих направлениях. Иногда движущей силой дизайна являются бусинки или великолепный кулон. В других случаях на ум приходит дизайн, и за ним следует охота за правильными бусинами. — Cheri
Вы сначала делаете наброски?
Только если я делаю особый дизайн с бисером, как кольца Aiko. Для нанизывания я беру разные подходящие бусинки / брелоки / подвески / распорки и начинаю нанизывать. Может потребоваться несколько попыток, прежде чем я буду доволен окончательным дизайном. — Синтия
Это зависит от проекта. Иногда я делаю наброски для элементов, которые связаны или связаны, может быть, не очень подробно, но достаточно, чтобы почувствовать общий масштаб или баланс. Для проектов по плетению или бисероплетению я обычно создаю выкройку. — Cheri
Дизайнов кирпичной стежки от Чери и Синтии, наброски на нашей миллиметровой бумаге для печати бисером.Где вы черпаете вдохновение?
Я много в Instagram, не только для того, чтобы смотреть на украшения.Мне вообще нравится смотреть на красивые картины природы. Меня всегда вдохновляют цвета, поэтому я люблю смотреть на сочетания цветов. Это может быть искусство, мексиканская плитка, интерьер дома, ткани и т. Д. — Cynthia
Я нахожу вдохновение везде. Природа, архитектура; старинные ткани и старинные украшения — одни из моих любимых. Pinterest — мой любимый инструмент для поиска вдохновения. — Cheri
Cheri и Cynthia также рассказали о своих процессах проектирования в видеороликах! В приведенном выше эпизоде Artbeads Cafe дамы рассказывают, как они начинают создавать, и даже рассказывают вам о своем процессе изготовления красивых украшений.
Они также обсуждают преодоление творческих блоков в этом коротком живом видео, которое мы опубликовали на Facebook.
Наконец, у Синтии есть несколько советов, если вы новичок в вышивании бисером или когда-либо разочаровывались в творческом процессе:
Самый важный совет, который я мог бы дать, — просто попробуйте! Иногда я не сразу придумываю идеальный дизайн или даже не сразу понимаю новую технику. Как и все остальное, это требует практики. Когда мы основали Artbeads, я никогда не думал, что я творческий человек, но я был очарован бисером, поэтому я ходил на занятия в магазине, пробовал разные вещи и практиковался.Вы бы видели мои простые петли вначале — страшно!
Получайте удовольствие от бисероплетения. Если вы расстроены своим дизайном, отложите его в сторону, сделайте перерыв, сходите на чашку чая или кофе с шоколадом или выведите собаку на прогулку. Вернитесь к своему дизайну, когда почувствуете себя лучше. Я люблю играть с музыкой. Это помогает мне очистить свой разум, потому что я хочу петь и не думаю о стрессе или разочаровании, которые могли бы возникнуть в этот день.
Мой брат дал мне лучший совет, когда я начинала заниматься бисером.Я был расстроен, потому что не мог придумать, что делать, и сказал ему, что чувствую себя таким напуганным, потому что существует так много отличных бусинок. Он сказал мне, что всегда будет кто-то лучше меня, и я просто должен стараться изо всех сил. Он был так прав! Да, есть много замечательных художников, и мне нравится смотреть, что они создают. Меня это действительно вдохновляет. Так что я перестал беспокоиться и позволил своему творчеству направлять меня.
Как проходит ваш процесс проектирования? Дайте нам знать в комментариях ниже и не стесняйтесь делиться любыми советами по бисероплетению!
5 основных элементов бисероплетения, которыми должен владеть каждый специалист по бисероплетению
Независимо от того, стали ли вы новым увлечением бисероплетение и изготовление ювелирных украшений или уже являетесь опытным мастером по изготовлению бисера, в любом наборе инструментов для бисероплетения есть ряд необходимых вещей.Главный товар, конечно же, — бусины, которых, несомненно, у вас уже будет достаточно!
Сбор разнообразных бус должно быть самой увлекательной частью вашего ювелирного приключения. Есть так много цветов и типов бусин на выбор, в том числе окрашенные нефритовые бусины, , стеклянные и полимерные бусины, драгоценные камни, металлические бусины, бусины и многое другое.
Однако, помимо бус, есть еще несколько важных вещей, которые вам следует держать под рукой для вашего следующего проекта по изготовлению украшений:
1.Переносные инструменты
Основными инструментами, которые очень полезны для вышивания бисером и изготовления ювелирных изделий в целом, являются плоскогубцы, плоскогубцы и кусачки. Плоскогубцы с круглым носком отлично подходят для изготовления петель в проволоке или в головных шпильках — например, для соединения компонента серьги с ушной проволокой.
1 — кусачки, 2 — плоскогубцы, 3 — плоскогубцы
Плоскогубцы часто используются для разглаживания обжимных бусинок и крошечных соединителей бусинок, чтобы закрепить их на месте после того, как они нанизаны на проволоку для завершения проекта бусинок.Кусачки можно использовать для отрезания полос проволоки или цепи и укорачивания шпилек. Эти инструменты часто доступны в комплекте из трех штук и станут ценным дополнением к вашему набору для бисероплетения!
2. Проволока, шнур и нить
Есть много типов материалов для нанизывания бус, которые вы можете добавить в свой набор, в зависимости от того, какие украшения вам нравится делать. Stretch Magic — это тип эластичной нити, которая также прозрачна и используется, например, для изготовления эластичных браслетов.Это также хороший материал, если вы делаете браслет для ребенка, потому что он легко расширяется, чтобы соответствовать его запястью.
Кожаный шнур полезен при выполнении более тяжелых проектов, поскольку он очень прочный и долговечный. Вы можете купить проволоку разного калибра, и чем тоньше ее калибр, тем легче будет гнуться и сгибаться проволока. Если вам нравится работать с проволокой, толстую проволоку можно скручивать и забивать молотком, чтобы создать удивительные украшения. Если вы любите вышивать бисером, вы можете включить ряд ниток для бисера, таких как Nymo (и иглы для бисероплетения), как часть вашего набора для бисероплетения.
3. Фурнитура для борта
Фурнитура — это «всякая всячина» из мира ювелирного дела и бисероплетения. От бусинок-распорок, дужек и колпачков до соединителей, застежек и шнуров — находки для изготовления ювелирных изделий — это то, что вам понадобится в вашем наборе, чтобы объединить ваши проекты.
Вам не понадобятся все мыслимые виды находок, но наличие хорошего ассортимента в вашем наборе для начала не только даст вам вдохновение, это будет означать, что вам не придется бросаться в местный магазин ремесел, когда вы действительно хочу продолжить свой проект!
4.Хранение бус
Чтобы ваши бусинки и оборудование были в порядке, существует множество систем хранения бусинок. Большинство из них имеют форму лотков-отсеков, и вы можете найти версии, которые ставятся друг на друга. Они особенно полезны, если у вас есть много бусин.
Если в вашем наборе для бисера есть бисер, лучше хранить их в оригинальных контейнерах. Бусины очень маленькие, и если их смешать с другим размером, будет сложно отличить их друг от друга.Мало того, разделение их после смешивания с другой партией может оказаться утомительной задачей!
5. Бисерная доска
Доска для бисера — это удобное приспособление, которое вы можете использовать для планирования дизайна вашего ювелирного проекта до того, как вы его сделаете. Выемки на доске для бусин предназначены для того, чтобы вы могли уложить бусинки именно там, где вы хотите, и это полезно, когда вы хотите увидеть, будет ли ваш дизайн украшений хорошо работать, прежде чем вы начнете его делать.Снаружи есть размеры, чтобы вы могли убедиться, что ваше украшение будет правильной длины.
Без чего не бисером? Дайте нам знать об этом в комментариях!
слов, написанных бисером, слова из бисера, анаграмма из бисера
Этот веб-сайт требует JavaScript для правильной работы.
Пожалуйста, включите JavaScript в вашем браузере.
БУСЫ — слово для игры
`глагол
бисер, бисер, бусины
для украшения бусин (круглых стекляшек)
37 слов для игры можно составить из «БУСИНЫ»
Слова из 2 букв (Найдено 10)
Слова из 3 букв (Найдено 14)
Слова из 4 букв (Найдено 10)
Слова из 5 букв (Найдено 3)
Комментарии
Что побудило вас искать бусы? Включите любые комментарии и вопросы, которые у вас есть по поводу этого слова.
записывающих бусинок | Scientific Volume Imaging
При записи изображений шариков всегда используйте те же условия визуализации и параметры микроскопа, которые вы будете использовать для фактических изображений, которые вы планируете восстановить.Устанавливая расстояния выборки, убедитесь, что вы соответствуете критерию Найквиста для вашей установки (для этого вы можете использовать наш бесплатный калькулятор Найквиста).Вы можете уменьшить шум и тем самым улучшить качество изображения шариков, записав несколько изображений и усреднив их. Это рекомендуется для конфокальных изображений из-за их низкого отношения сигнал / шум. При этом следите за обрезкой, проверяя (перед усреднением), что ни одно из изображений не содержит подозрительно большого количества пикселей / вокселей со значением интенсивности 0 или 255.Для изображений с высоким SNR, например, полученных с помощью широкоугольного микроскопа, одного изображения гранул может быть достаточно, чтобы отогнать PSF от. Однако помните, что это изображение нельзя использовать напрямую в качестве PSF: сначала его нужно отцентрировать, удалить фон и скорректировать его на шум и конечный размер гранул.
Объем изображения
Если количество плоскостей, записанных вдоль Z, слишком мало, вы получите сообщение об ошибке при дистилляции PSF о том, что «размер осевого изображения слишком мал».Также может случиться так, что эта ошибка не отображается, но на вашем изображении не обнаружено ни одного пригодного для использования шарика.
Для правильной дистилляции PSF важно не (только) количество срезов, но и общий физический объем, который фактически отображается. Хорошее изображение бусинок включает сигнал от большой области вокруг бусинок, так как результирующий PSF будет иметь конус размытия вокруг своего центрального пика. Это размытие особенно велико на изображениях с широким полем и низкой числовой апертурой (NA). Например, при использовании 0.95 NA объектив в широкоугольном микроскопе PSF очень большой вдоль Z, поэтому для регистрации всей релевантной информации в этом направлении должен быть отображен больший объем, чем если бы NA был. Вы можете приобрести больше самолетов, но вы также можете уменьшить плотность выборки по Z, если вы по-прежнему выполняете критерий выборки Найквиста. Идеальную частоту дискретизации (которая зависит от NA) для нормальной визуализации можно найти с помощью калькулятора Найквиста, но при записи гранул рекомендуется некоторая передискретизация.
Если вы попросите калькулятор показать также PSF, вы сможете узнать, насколько большим он должен быть, как в реальном объеме, так и в количестве образцов при отображении с частотой Найквиста. Обратите внимание, однако, что вы можете (или даже должны) записывать меньше плоскостей по Z, чем показано там, потому что области с низкой интенсивностью на краю PSF слишком сильно подвержены шуму, чтобы их можно было надежно зафиксировать.
Пример: Для типичного широкоугольного микроскопа с числовой апертурой 1,3 NA гранулы должны быть записаны в трехмерное изображение, которое покрывает не менее ~ 12 мкм по Z.50-100 секций на длине волны 200 нм удовлетворяют критерию Найквиста. Если числовая апертура равна 0,95, изображение должно быть больше по оси Z, покрывая не менее ~ 21 мкм. Однако идеальная частота дискретизации по Z также больше: примерно 700 нм. Если вы записываете гранулы с некоторой передискретизацией, с одной плоскостью на каждые 500 нм, тогда вам понадобится 42 плоскости, чтобы покрыть требуемый объем. Следовательно, требуемый объем для NA = 0,95 может быть покрыт без записи большего количества плоскостей, чем для NA = 1,3.
Плотность шариков
Если плотность шариков на изображении намного больше, чем 10 шариков на область 20 мкм x 20 мкм, скорее всего, они расположены слишком близко друг к другу.Их размытые изображения затем накладываются друг на друга, и их PSF больше не могут быть разделены. Дистиллятор PSF отбраковывает шарики, расположенные слишком близко друг к другу. Вы можете сделать его критерий менее строгим, используя параметр «уменьшить размер PSF», но для его правильной работы есть предел.
Плотность шариков на этом изображении неплохая, но более низкая плотность была бы даже лучше, чтобы свести к минимуму вероятность перекрытия PSF.
Это изображение имеет настолько высокую плотность гранул, что его нельзя использовать для дистилляции PSF.
Протокол иммунопреципитации (IP) | Abcam
Иммунопреципитация — это метод очистки белка. Антитело к интересующему белку инкубируют с клеточным экстрактом, позволяя антителу связываться с белком в растворе. Затем комплекс антитело / антиген извлекают из образца с помощью агарозных гранул, связанных с белком A / G. Это изолирует интересующий белок от остальной части образца. Затем образец можно разделить с помощью SDS-PAGE для вестерн-блоттинга.
Содержание
Буферы для лизиса
Идеальный буфер для лизиса минимизирует денатурацию белка при высвобождении достаточного количества белков из образца. Неионные детергенты, такие как NP-40 и Triton X-100, менее агрессивны, чем ионные детергенты, такие как SDS и дезоксихолат натрия. Другие переменные, которые могут повлиять на успех иммунопреципитации, включают концентрацию соли, концентрацию двухвалентных катионов и pH. Чтобы оптимизировать переменные, они должны быть протестированы в следующих диапазонах (из Харлоу и Лейн, стр. 231):
- Соли: 0–1 M
- Моющее средство, неионогенное: 0.1–2%
- Моющее средство, ионное: 0,01–0,5%
- Двухвалентные катионы: 0–10 мМ
- ЭДТА: 0–5 мМ
- pH: 6–9
Неденатурирующий буфер для лизиса
Применение для антигенов, растворимых в детергенте и распознаваемых антителом в нативной форме. Тритон Х-100 может быть заменен НП-40.
- 20 мМ Tris HCl pH 8
- 137 мМ NaCl
- 1% Nonidet P-40 (NP-40)
- 2 мМ EDTA
Хранить до 6 месяцев при 4 ° C.Непосредственно перед применением добавляют ингибиторы протеаз.
Для удобства можно приготовить 10% исходный раствор дезоксихолата натрия (5 г на 50 мл). Его необходимо беречь от света.
Буфер для лизиса растворимого белка, не содержащий детергентов
Некоторые растворимые белки могут не требовать использования детергентов. Используйте этот буфер для механического лизиса клеток, такого как гомогенизация с помощью гомогенизатора Даунса.
PBS, содержащий:
- 5 мМ ЭДТА
- 0.02% азид натрия
Хранить до 6 месяцев при 4 ° C. Непосредственно перед применением добавляют ингибиторы протеаз.
Денатурирующий лизисный буфер для растворимых антигенов, не содержащих детергентов
Эпитопы нативных белков недоступны для антител, которые распознают только денатурированные белки. При сборе и лизировании клеток нагрейте клетки в денатурирующем буфере для лизиса. Этот метод также можно использовать для антигенов, которые не могут быть извлечены из клетки неионными детергентами.Использование ДНКазы1 будет способствовать извлечению белков из хроматина.
Хранить до 1 недели при комнатной температуре.
Непосредственно перед использованием добавьте
- 10 мМ дитиотреитола или бета-меркаптоэтанола
- Ингибиторы протеаз 15 Ед / мл DNase1
Промывочные буферы
- 10 мМ Трис; довести pH до 7,4
- 1 мМ ЭДТА
- 1 мМ ЭГТА; pH 8,0
- 150 мМ NaCl
- 1% Triton X-100
- 0,2 мМ ортованадат натрия
- Смесь ингибиторов протеазы
Хранить до 6 месяцев при 4 ° C.Непосредственно перед употреблением добавить ингибитор протеазы.
Другие реагенты
Ингибиторы протеаз
Протеолиз, дефосфорилирование и денатурация начинаются сразу после лизиса клеток. Помещение образцов на лед замедлит эти процессы, но также доступны коктейли из ингибиторов протеаз и фосфатаз. Если коктейль не используется, PMSF (50 мкг / мл) и апротинин (1 мкг / мл) являются ингибиторами протеазы, обычно используемыми для иммунопреципитации.
Прочие реагенты
- Стерильный PBS pH 7.4
- Стерильный PBS-BSA 1% мас. / Об. (Фильтрованный)
- Буфер TBST
- Буфер для загрузки / образца для вестерн-блоттинга
- VeriBlot для иммунопреципитации вторичных антител, которые предпочтительно обнаруживают невосстановленные, неденатурированные первичные антитела во время вестерн-блоттинг.
- 100 мМ маточный раствор ЭДТА получают из 1,86 г ЭДТА, растворенного в 40 мл воды. Добавьте NaOH, чтобы довести pH до 7,4. Наконец, доведите общий объем до 50 мл.
Подготовка лизатов
Лизаты из клеточной культуры (неденатурирующие)
- Поместите чашку для культивирования клеток на лед и промойте клетки ледяным PBS.
- Слейте PBS, затем добавьте ледяной буфер для лизиса (1 мл на 107 клеток / чашку 100 мм2 / колбу 150 см2; 0,5 мл на 5×106 клеток / чашку 60 мм2 или колбу 75 см2).
- Соскребите прилипшие клетки с чашки с помощью холодного пластикового скребка для клеток, затем осторожно перенесите суспензию клеток в предварительно охлажденную микроцентрифужную пробирку.
- Поддерживайте постоянное перемешивание в течение 30 минут при 4 ° C.
- Центрифуга в микроцентрифуге при 4 ° C.
Вам может потребоваться изменить силу и время центрифугирования в зависимости от типа ячейки.Рекомендуемое значение — 20 минут при 12000 об / мин, но вы должны оптимизировать это для вашего конкретного эксперимента (например, лейкоцитам необходимо очень легкое центрифугирование).
- Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед. Аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, оставленную на льду, и выбросьте осадок.
Лизаты из клеточной культуры (денатурирующие)
- Добавьте 100 мкл денатурирующего лизисного буфера к 0,5–2×107 клеток.
- Хорошо перемешайте, энергично взбалтывая в течение 2–3 секунд на максимальной скорости.Перенести клеточную суспензию в пробирку для микроцентрифуги.
На этой стадии раствор может быть вязким из-за высвобождения ДНК.
- Нагрейте образцы до 95 ° C в течение 5 минут до денатурирования.
- Разбавьте суспензию 0,9 мл неденатурирующего буфера для лизиса. Осторожно перемешайте.
Избыток 1% Triton X-100 в неденатурирующем буфере для лизиса гасит SDS в исходном денатурирующем буфере.
- Фрагментируйте ДНК, пропуская лизированную суспензию 5–10 раз через иглу, прикрепленную к шприцу на 1 мл.
Повторяйте механическое прерывание, пока вязкость не снизится до приемлемого уровня. Если ДНК не полностью переварена и фрагментирована, это может помешать разделению осадка и супернатанта после центрифугирования .
- Инкубируйте на льду 5 мин.
- Выполните иммунопреципитацию
Лизаты из ткани
- Рассеките ткани чистыми инструментами и как можно быстрее. По возможности делайте это на льду, чтобы предотвратить разложение протеазами.
- Поместите ткань в микроцентрифужные пробирки с круглым дном и погрузите в жидкий азот для быстрого замораживания. Храните образцы при -80 ° C для дальнейшего использования или на льду для немедленной гомогенизации.
- Для кусочка ткани массой ~ 5 мг быстро добавьте в пробирку ~ 300 мкл лизирующего буфера и гомогенизируйте с помощью электрического гомогенизатора.
- Промойте лезвие дважды еще одним 300 мкл буфера для лизиса на одно полоскание, а затем поддерживайте постоянное перемешивание в течение 2 часов при 4 ° C (например, поместите на орбитальный шейкер в холодильник).
Объемы буфера для лизиса должны определяться в зависимости от количества присутствующей ткани. Белковый экстракт не должен быть слишком разбавленным, чтобы избежать потери белка и минимизировать объем образца для загрузки в гели. Минимальная концентрация — 0,1 мг / мл; оптимальная концентрация — 1–5 мг / мл.
Если требуются денатурированные образцы, используйте денатурирующий лизисный буфер и выполните шаги 2–5 из описанного выше протокола денатурирования.
- Центрифуга в течение 20 минут при 12000 об / мин при 4 ° C в микроцентрифуге.Осторожно извлеките пробирки из центрифуги и поместите на лед, аспирируйте супернатант и поместите в свежую пробирку, хранящуюся на льду. Выбросьте гранулы.
Предварительная очистка лизатов
Предварительная очистка лизата может помочь уменьшить неспецифическое связывание и уменьшить фон. Однако, если окончательное обнаружение белка проводится вестерн-блоттингом, предварительная очистка может не потребоваться, если только контаминирующий белок не мешает визуализации интересующего белка.
- Добавьте 50 мкл нецелевого антитела того же вида и изотипа, что и антитело иммунопреципитации, или нормальную сыворотку (кролик часто предпочтительнее, см. Harlow and Lane, стр. 243) к 1 мл лизата. Инкубируйте 1 ч на льду.
- Добавьте к лизату 100 мкл суспензии шариков.
- Инкубируйте 10–30 мин при 4 ° C при осторожном перемешивании.
- Вращение в микроцентрифуге при 14 000 x g при 4 ° C в течение 10 мин.
- Отбросить осадок с шариками и оставить супернатант для иммунопреципитации.
Для увеличения выхода гранулы можно промыть еще 1 или 2 раза в буфере для лизиса, а супернатанты собрать вместе.
Важно убедиться, что удаляется как можно больше нормальной сыворотки, поскольку это будет конкурировать с антителом против интересующего антигена. Чтобы проверить это, можно провести тест с буфером для лизиса вместо образца, выполнив все шаги предварительной очистки, как указано выше.
Нанесение геля из полученного супернатанта и окрашивание Кумасси покажет, эффективно ли удаляется сывороточный Ig.Если сыворотка не была удалена в достаточной степени, будут присутствовать полосы 50 и 25 кДа для тяжелых и легких цепей; его присутствие может способствовать слабой иммунопреципитации. Рассмотрите возможность уменьшения количества сыворотки или увеличения количества шариков, инкубированных с вашими образцами на этапе предварительной очистки
Иммунопреципитация
Существует несколько различных методов иммунопреципитации белков. Первый подход (метод А) заключается в смешивании антитела с образцом белка с последующим добавлением протеина A / G.Этот метод обеспечивает высокую чистоту белка; однако антитела также элюируются вместе с представляющим интерес белком, что иногда создает трудности при обнаружении вестерн-блоттингом.
Второй подход (метод B) заключается в связывании антитела с гранулами белка A / G и последующем смешивании с антигеном. Этот метод дает меньший выход, чем первый, но позволяет избежать проблемы совместной элюции антител.
Метод A
Иммунопреципитация с антителами в растворе:
- На льду в микроцентрифужной пробирке добавьте 10–50 мкг клеточного лизата плюс рекомендованное количество антител (см. Ниже).Обычно в пилотных экспериментах фиксированное количество белка осаждается за счет увеличения количества антител.
Рекомендуемую концентрацию антител см. В таблице данных по антителам. В качестве рекомендации используйте
1–5 мкл поликлональной антисыворотки
1 мкг аффинно очищенного поликлонального антитела
0,2–1 мкл асцитной жидкости (моноклональное антитело)
20–100 мкл супернатанта культуры (моноклональное антитело) - Инкубируйте образец с антителом в течение 1–12 ч при 4 ° C, желательно при осторожном перемешивании или вращении.Продолжительность инкубационного периода зависит от количества белка и аффинных свойств антитела.
- Тем временем приготовьте шарики сефарозы. Если вы используете моноклональные антитела, выберите шарики сефарозы, связанной с G-белком. При использовании поликлональных антител обычно подходят бусинки сефарозы, связанные с протеином А (см. Таблицу «Выбор протеиновых бусинок» ниже). Если гранулы представлены в виде порошка, инкубируйте 100 мг гранул в 1 мл 0,1 М PBS, промойте в течение 1 часа, чтобы они набухли, затем центрифугируйте, удалите супернатант и выбросьте.
Добавьте 1 мл PBS 0,1% BSA, перемешайте в течение 1 ч, используя ротатор Eppendorf, и дважды промойте PBS. Удалите супернатант и добавьте 400 мкл буфера, содержащего ингибиторы протеаз (может быть таким же, как буфер для лизиса). Теперь суспензия готова к использованию. Может храниться при 4 ° C несколько дней; в течение более длительного времени держите шарики в PBS с 0,02% азидом (тщательно промойте шарики в день использования и добавьте свежий лизисный буфер). Вы также можете купить предварительно набухшие шарики в виде готовой суспензии.
Рекомендуется использовать наконечники для пипеток с обрезанным концом, чтобы не повредить шарики.
При использовании антител IgM не используйте гранулы, конъюгированные с протеином A или протеином G. Используйте анти-IgM-связанные с протеином А или шарики с протеином G. Затем IgM свяжется с гранулами путем связывания с антителом против IgM.
- Хорошо перемешайте суспензию и добавьте 70–100 мкл шариков в каждый образец. Всегда храните образцы на льду. Бусинки будут прилипать к краям наконечника, поэтому постарайтесь свести к минимуму движение в пипетке и используйте надрез на 5 мм от верха.
- Инкубируйте смесь лизатных шариков при 4 ° C и роторном перемешивании в течение 4 часов (оптимальное время инкубации можно определить в предварительном эксперименте).
- Выполните следующие действия по стирке.
Метод B
Иммунопреципитация конъюгатом антитело-агароза:
- Чтобы приготовить агарозу / сефарозу на основе белка A или G, выполните шаг 3 метода A.
- Добавьте примерно 70–100 мкл суспензии белка A. -, или G-, или L-агарозный конъюгат в микроцентрифужные пробирки.
- Добавьте 10 мкл первичного антитела. В качестве ориентира используйте разведение, рекомендованное в паспорте антител для иммунопреципитации.
- Инкубируйте смесь антитело-гранулы в течение 1–4 ч при 4 ° C, осторожно перемешивая смесь на подходящем шейкере.
- Центрифуга при 1000–3000 x g в течение 2 минут при 4 ° C и слить супернатант.
- Добавьте к смеси 1 мл лизирующего буфера, продолжая осторожно перемешивать, а затем центрифугируйте при 3000 x g в течение 2 минут при 4 ° C. Повторите этот этап промывки дважды.
- После промывания смеси шариков и антител добавьте 10–50 мкг клеточного лизата.
- Инкубируйте смесь конъюгата лизат-гранула / антитело при 4 ° C при роторном перемешивании в течение от 4 ч до ночи, если требуется (оптимальное время инкубации можно определить в предварительном эксперименте).
- По окончании инкубации продолжите промывку, указанную ниже.
Промывка
- Центрифугируйте пробирки, удалите супернатант с шариков и выбросьте. Теперь интересующий белок должен быть специфически связан с антителом, покрывающим шарики.
- Промойте шарики промывочным буфером или буфером для лизиса три раза, чтобы удалить неспецифическое связывание. Для каждой промывки осторожно перемешайте шарики с промывочным буфером, центрифугируйте при 4 ° C и удалите супернатант.
- Осторожно удалите как можно больше промывочного буфера с шариков.Теперь комплекс готов к элюированию с шариков.
Элюция
Для элюирования белка из гранул можно использовать один из трех методов. Буфер SDS является самым жестким, он также элюирует нековалентно связанные антитела и фрагменты антител вместе с интересующим белком. С другой стороны, глициновый буфер мягко элюирует белок с уменьшенным количеством элюированного антитела.
Глицин буферное элюирование
В этой процедуре комплекс элюируется из гранул путем подкисления с использованием буфера, содержащего 0.1–0,2 М глицин, pH 2,0–3,0. Низкий pH глицина ослабляет взаимодействие между антителом и шариками. Этот метод выгоден, так как гранулы можно повторно использовать после удаления глицинового буфера. Однако элюированный образец следует немедленно нейтрализовать трис, pH 8,0–8,5.
- Элюируйте шарики (50 мкл) 3 x 50 мкл 0,2 М глицина pH 2,6 (1: 1), инкубируя образец в течение 10 минут при частом встряхивании перед осторожным центрифугированием.
- Объедините элюат и нейтрализуйте, добавив равный объем Трис pH 8.0.
При необходимости повторите эти шаги.
- Нейтрализуйте шарики, промывая 2 раза 150 мкл буфера для лизиса (без детергента) и пула с элюатом.
- Запустите образцы с помощью вестерн-блоттинга, чтобы проверить осаждение белков.
Элюирование буфером SDS
Комплекс Ag-Ab элюируется из гранул путем нагревания или кипячения образцов в загрузочном буфере с денатурирующим SDS. Этот метод выгоден тем, что метод экстракции очень эффективен, а полученный образец более концентрированный.
- Элюируйте 50 мкл шариков путем нагревания в 50 мкл 2-кратного загрузочного буфера SDS без DTT в течение 10 мин при 50 ° C.
- Гранулы гранул, перенесите супернатант в новую пробирку и добавьте DTT в концентрации 100 мМ (элюция 1).
- Добавьте 50 мкл 2 x SDS-буфера с DTT к осажденным шарикам (элюция 2).
- Прокипятите элюированные образцы в течение 5 минут и проанализируйте содержание образца с помощью вестерн-блоттинга. Как правило, целевой белок должен присутствовать как в элюции 1, так и в элюции 2, хотя количество в каждом будет варьироваться, и элюция 2 будет иметь больше контаминации IgG, чем элюция 1.
Элюирование буфером мочевины
Этот метод полезен для масс-спектрометрии, поскольку образец может быть расщеплен протеолитическими ферментами.
- Промыть шарики буфером для предварительной промывки мочевины (50 мМ Трис, pH 8,5, 1 мМ EGTA, 75 мМ KCl). Удалите весь остаточный супернатант.
- Добавьте 2–5 объемов буфера для элюции мочевины (6–8 М мочевина, 20 мМ Tris pH 7,5 и 100 мМ NaCl) и вращайте в течение 30 мин при комнатной температуре с частым встряхиванием перед осторожным центрифугированием.
- Повторите этот процесс еще как минимум два раза, чтобы убедиться, что весь захваченный комплекс был освобожден от гранул. Гранулируйте шарики и перелейте мочевину в новую пробирку.
- Запустите образцы с помощью вестерн-блоттинга, чтобы проверить осаждение белков.
Выбор правильных бусинок — сводная таблица
Обозначение:
+++ = Сильное связывание
++ = Среднее связывание
+ = Слабое связывание
— = Нет связывания
Видовой изотип иммуноглобулина | Белок А | Белок G | ||
Человеческий IgG1 | +++ | +++ | ||
Человеческий IgG3 | — | +++ | +++ | +++ |
Человеческий IgM | Использовать антитела против человеческого IgM | | ||
Человеческий IgE | — | + | ||
Человеческий IgA | — | + 0 | +++ | |
Мышиный IgG2a | +++ | +++ | ||
Мышь IgG2b | 10 | |||
Мышиный IgG3 | + | + | ||
Мышиный IgM | Использовать anti Mouse IgM | | ||
Крысиный IgG2a | — | 90 705|||
Крысиный IgG2b | — | ++ | ||
Крысиный IgG2c | 10 все изотипы | — | — | |
Корова все изотипы | ++ | +++ | 000все | 000|
++ | ||||
Морская свинка все изотипы | +++ | ++ | ||
Хомяк все изотипы | + 9709 907||||
Лошадь все изотипы | + | +++ | ||
Свинья все изотипы | + | ++ | ||
Кролик все изотипы | +++ | ++ | ||
+++ |
Ссылки
Протоколы предоставлены Abcam «AS-IS» на основе экспериментов в лабораториях Abcam с использованием реагентов и продуктов Abcam; ваши результаты от использования протоколов вне этих условий могут отличаться.